Zusammenfassung
Die in der Tierernährung zur besseren Verwertung pflanzlicher Futtermittel durch landwirtschaftliche Nutztiere verwendeten Futterzusatzenzyme (Xylanasen u. 1-3,1-4-
β
-Glucanasen) unterliegen den gleichen Anforderungen wie alle Futterzusatzstoffe. Enzymaktivität wird über die Wirkung auf spezifische Substrate bestimmt. Nachweisempfindlichkeit und Meßbereich schwanken wegen der verschiedenen Eigenschaften natürlicher Substrate und den biochemischen Charakteristika der Enzyme. Physikalisch, chemisch und biologisch modifizierte Substrate wurden in den Aktivitätsbestimmungsmethoden eingesetzt. Die Futterzusatzenzympräpate Avizyme 1300® (T. longibrachiatum, T. viride), Biofeed plus® (H. insolens), Biofeed Wheat® (A. oryzae), Lyxasan® (A. niger I), Roxazyme® (T. viride), Barlican® (T. reesei I), Biopract® (T. reesei II), Energex® (A. niger II), Novozyme 104® (k.a.), und Hostazym X® (k.a.) wurden charakterisiert. Bis auf Biofeed Wheat
®
bestehen alle Präparate aus einem Enzymgemisch mit unterschiedlichem isoelektrischen Punkt, pH-Optimum, etc. Jedes Präparat zeigt eine von der Enzymkonzentration unabhängige unterschiedliche Verteilung der Hydrolyseprodukte, welche die Aktivitätsbestimmungen beeinflußt. Für jedes Enzympräparat muß eine eigene Kalibrationsreihe aufgenommen werden. Chromogene Substrate sind Xylane oder
&beta:
-Glucane (ultraschallbehandelt, carboxymethyliert, autoklaviert, unbehandelt) mit kovalent oder ionisch gebundenem Farbstoff. Die Hydrolyse setzt ionisch gebundenen Farbstoff bzw. Hydrolyseprodukte mit kovalent gebundenem Farbstoff frei. Die in dieser Arbeit hergestellten Präparate hatten gegenüber den kommerziellen Präparaten keinen Vorteil. Ultraschallbehandeltes Haferspelzenxylan ermöglicht die Xylanaseaktivitätsbestimmung über die Viskositätsabnahme der Substratlösung ohne die Messung der Anfangsviskosität, da das anfängliche Ansteigen der Viskosität nach der Enzymzugabe entfällt. Im Agardiffusionstest wird enzymhaltige Lösung in den Löchern einer substrathaltigen Agarplatte (Xylan,
β
-Glucan) inkubiert und diese mit Kongorot angefärbt, hydrolysiertes Substrat ist durch helle Lysezonen zu erkennen. Der Meßbereich und die Detektionsempfindlichkeit wurde durch Verwendung modifizierter Substrate (Ultraschall- u. Autoklavbehandlung) und den Einsatz eines Photodokumentationssystems verbessert. In der neuen Methode Farbreaktion wurde Substrat mit Enzympräparat inkubiert und mit dem Farbstoff Reaktivgrün umgesetzt. In Natriumacetatpuffer konnten Enzymaktivitäten bis zu 0,005 IE/ml, in Futtermittelextrakt bis 0,05 IE/ml bestimmt werden. |
