FU Berlin Digitale Dissertation
Pamela Tan : Die Rolle von Tapasin bei der Antigenpräsentation durch MHC-Klasse-I-Moleküle Role of tapasin in antigen presentation by MHC class I molecules
|Zusammenfassung| |Inhaltsverzeichnis| |Ergänzende Angaben|

Zusammenfassung Zusammenfassung Infizierte Zellen präsentieren dem Immunsystem auf ihrer Zelloberfläche antigene Peptide, die aus eingedrungenen Pathogenen generiert werden. Der Präsentation der Peptide geht die korrekte Assemblierung des MHC-Peptid-Komplexes im Endoplasmatischen Retikulum (ER) voraus. Innerhalb dieser Arbeit wird gezeigt, daß das ER-residente Protein Tapasin die Peptidbeladung auf MHC-Klasse-I-Moleküle sowohl in quantitativen als auch in qualitativen Aspekten positiv beeinflußt. Die Rekonstitution der Peptidbeladung in der B-lymphoblastoiden Zelllinie 721.220 durch die Expression von Tapasin führt auf der Plasmamembran der Zellen zu einer Steigerung der Menge an langlebigen MHC-Klasse-I-Molekülen, an die Peptide optimaler Länge binden. Die Selektion stabiler MHC-Peptid-Komplexe geschieht durch Tapasin im ER, indem das MHC-Klasse-I-Molekül in einen TAP-assoziierten Beladungskomplex rekrutiert und dort die Peptidbeladung optimiert wird. Tapasin induziert zunächst die Bildung zweier Subkomplexe: zum einen wird Calretikulin an das MHC-Molekül rekrutiert, zum anderen wird die Thioreduktase ER60 Tapasin-vermittelt an TAP gebunden. Die Tapasin-vermittelte Brückenbildung zwischen diesen beiden Subkomplexen führt auf den untersuchten HLA-B*4402- und HLA-B8-Molekülen zur verbesserten Ausbildung allospezifischer Bw4-/Bw6-Epitope. Lösliche Tapasin-Konstrukte und Maus-Tapasin sind nicht in der Lage, den vollständigen Beladungskomplex aus dem MHC-Klasse-I-Molekül, Calretikulin, ER60 und TAP zu assemblieren. Die in diesen Fällen suboptimale Peptidbeladung ist durch eine kürzere Lebensdauer an der Zelloberfläche und eine geringere Thermostabilität der MHC-Moleküle im Lysat gekennzeichnet. Mit den Ergebnissen dieser Arbeit kann Tapasin in funktionelle Domänen eingeteilt werden. Es wurde gezeigt, daß die N-terminale Domäne von Tapasin für die Peptidbeladung auf HLA-B8 und HLA-B*4402 Moleküle essentiell ist. Schon die Deletion von 19 Aminosäuren am N-Terminus von Tapasin verhindert die Plasmamembran-expression dieser MHC-Moleküle. Unverkürztes Humanes und murines Tapasin sind darüberhinaus in der Lage, die Expression von TAP über ihre Membranregion bis auf das 10fache zu steigern. Fehlt die Membran- und zytoplasmatische Domäne, ist keine Steigerung der TAP-Expression nachweisbar. Die Unterbrechung eines Leucin-Reißverschlußmotivs im Transmembranbereich von Tapasin durch den Aminosäureaustausch L410F hebt die ER-Retention von Tapasin teilweise auf und führt zu einem um 70-80% erniedrigten TAP-Expressionsniveau.

Inhaltsverzeichnis Die gesamte Dissertation können Sie als gezippten tar-File oder als zip-File laden. Durch Anklicken der Kapitelüberschriften können Sie das Kapitel in PDF-Format laden: TITEL Die Rolle von Tapasin bei der Antigenpräsentation durch MHC-Klasse-I-Moleküle EINLEITUNG   Das Immunsystem 1 Der Haupthistokompatibitätskomplex (MHC) 3 Chaperone für MHC-Klasse-I-Moleküle 11 Antigenprozessierung und Antigenpräsentation durch MHC-Klasse-I-Moleküle 14 Die Bedeutung der Peptidpräsentation durch MHC-Klasse-I-Moleküle 22 Störungen der Antigenpräsentation durch MHC-Klasse-I-Moleküle 24     FRAGESTELLUNG UND ZIELSETZUNG 27     MATERIAL Geräte 28 Verbrauchsmaterialien 28 Chemikalien 29 DNA 31 Proteine 33 Kits 35 Puffer und Lösungen 36 Zelllinien 42 Mausstämme 42     METHODEN   Molekularbiologische Methoden 43 Proteinchemische Methoden 46 Zellbiologische Methoden 52     ERGEBNISSE   Generierung von 721.220.Tapasin-Transfektanten 57 Der Einfluß von Tapasin auf den Peptidtransport ins ER 60 Tapasin als Chaperon für HC/b2m-Dimere 64 Die Assemblierung des Peptidbeladungskomplexes 67 Der Einfluß von Tapasin auf zelloberflächenexprimierte MHC-Klasse-I-Moleküle 74 Der Einfluß von Tapasin auf die Peptidbeladung von MHC-Klasse-I-Molekülen 79     DISKUSSION 90     ANHANG   Literaturverzeichnis 108 Abkürzungsverzeichnis 121 Danksagungen 122

Ergänzende Angaben:
Online-Adresse:	http://www.diss.fu-berlin.de/2001/231/index.html
Sprache:	Deutsch
Keywords:	antigen presentation, MHC class I molecule, ER chaperone, peptide loading, peptide editor
DNB-Sachgruppe:	30 Chemie
Datum der Disputation:	29-Oct-2001
Entstanden am:	Fachbereich Biologie, Chemie, Pharmazie, Freie Universität Berlin
Erster Gutachter:	PD Dr. Frank Momburg
Zweiter Gutachter:	Prof. Ralf Erdmann
Kontakt (Verfasser):	pamela.tan@biomax.de
Kontakt (Betreuer):	f.momburg@dkfz.de
Abgabedatum:	28-Nov-2001
Freigabedatum:	02-Jan-2002

 

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