Zusammenfassung
Die Ursache der Alzheimer-Krankheit ist immer noch
unbekannt, jedoch ist sie nach dem derzeitigen Kenntnisstand eng verknüpft
mit der Ablagerung des Amyloid-Peptids im Gehirn der Patienten. Daher spielt
das Amyloid bei der Suche nach Medikamenten und Diagnostika eine entscheidende
Rolle. Durch Einsatz der RNA-Technologien sollte mit dieser Arbeit ein
Hilfsmittel für die weitere Untersuchung der Alzheimer-Krankheit zur
Verfügung gestellt werden. Die in vitro-Selektion erlaubt das
Design von spezifischen Nukleinsäuren gegen fast jedes Zielmolekül.
Damit ist zu den Antikörpern eine neue Stoffklasse getreten, mit der man
einige Probleme der Antikörper umgehen kann. Vor allem die chemische
Synthese der Nukleinsäuren erlaubt eine maßgeschneiderte
Modifizierung wie z. B. den Einbau von Reportermolekülen, wodurch sie sich
hervorragend eignen für analytische und diagnostische Aufgaben. Da eine
Veränderung des Amyloid-Gehalts im Blut von Alzheimer-Patienten
beschrieben wurde, wäre ein Einsatz von Aptameren für eine Diagnose
denkbar. Weiterhin wurden bereits Antikörper vorgestellt, die eine
Aggregation des Amyloids zu den senilen Plaques verhindern kann. Auch hier
wäre ein Einsatz von Aptameren vorstellbar.
Mit Hilfe der Methode der in vitro-Selektion wurde
aus einer kombinatorischen RNA-Bibliothek mit ca. 1015
unterschiedlichen Molekülen hochaffine RNA-Aptamere gegen das Amyloid
b A4(1-40) und ein Fragment b A4(1-16) isoliert. Dazu wurde eine DNA-Bibliothek mit 70
randomisierten Nukleotiden chemisch synthetisiert und für die Selektion in
RNA transkribiert. Nach 8 Selektionszyklen, bestehend aus Selektion und
Amplifikation, konnten affine Moleküle isoliert werden. Die apparenten
Dissoziationskonstanten dieser Aptamere liegen bei 29-48 nM für das lange
Peptid bzw. 758 nM für das kurze b
A4(1-16) Fragment. Die für das Amyloid erhaltenen Aptamere liegen in dem
Bereich der besten für Peptide bisher isolierten Aptamere, während
für kleinere, flexiblere Peptide häufig Aptamere im mikromolaren
Bereich beschrieben wurden.
In dieser Arbeit wurden Wege zu neuen Hilfsmitteln für
die Untersuchung und Diagnose der Alzheimer-Krankheit vorgestellt. Nun sollten
diese Aptamere auf ihre Wirksamkeit überprüft werden, um dann eine
Verkürzung der Sequenzen und eine Modifizierung der RNA zur Stabilisierung
gegenüber RNasen anzuschließen.
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