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FU Berlin
Digitale Dissertation

Volker Henn :
TRAP (TNF-related activation protein) on activated platelets induces a pro-inflammatory reaction of endothelial cells
TRAP (TNF-related activation protein) auf aktivierten Thrombozyten induziert eine Entzündungsreaktion der Endothelzellen

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Abstract

The surface protein TRAP and its receptor CD40 play a pivotal role in the immune system. We could show for the first time that both TRAP and CD40 are expressed by human platelets, which confers a pro-inflammatory activity on these cells.
Unstimulated platelets store preformed TRAP as a transmembrane protein in an intracellular compartment. After strong activation of platelets, TRAP is very rapidly transferred to the surface membrane. The expression on the surface leads within a few hours to a proteolytic cleavage of TRAP which is then released as a soluble form (sTRAP) into the blood plasma.
The function of TRAP on platelets was characterized in the interaction with CD40-expressing endothelial cells. In the presence of thrombin, platelets can activate endothelial cells via the TRAP/CD40 signaling pathway and induce the expression of adhesion molecules and the secretion of chemokines. The interaction of TRAP-expressing platelets and the endothelium could be demonstrated in vivo. Platelets are thus able to induce a proinflammatory reaction of endothelial cells.
Platelets express both TRAP and its receptor CD40. CD40 does not seem to play a role in the aggregatory reaction of platelets, but the interaction with CD40 induces the cleavage of membrane TRAP. The soluble sTRAP - in contrast to the membrane form - does not activate endothelial cells, even in combination with other agonists. The main function of CD40 on platelets appears to be the regulation of its ligand TRAP, i.e. the transformation of the active membrane form to the biologically inactive soluble form. The proinflammatory effect of platelets is thus limited in time.

Table of Contents

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Titel und Inhalt
Abbildungsverzeichnis
Abkürzungen
1 Einleitung
1.1 Thrombozyten
1.2 Endothelzellen und die entzündliche Reaktion
1.3 CD40 und TRAP in Entzündung und Immunabwehr
1.4 Problemstellung
2 Methoden und Materialien
2.1 Herkunft der verwendeten Materialien
2.2 Zellbiologische Methoden
2.3 Proteinchemische Methoden
2.4 Molekularbiologische Methoden
3 Ergebnisse
3.1 TRAP auf Thrombozyten
3.1.1 sTRAP-Freisetzung durch unterschiedliche Zellpopulationen des menschlichen Bluts
3.1.2 Oberflächenexpression von TRAP auf Thrombozyten
3.1.3 Kinetik der sTRAP-Freisetzung
3.1.4 Immunpräzipitation und Western Blot zur Detektion von TRAP
3.1.5 Immunpräzipitation von TRAP mit einem CD40-Fusionsprotein
3.1.6 Vergleich von TRAP aus Thrombozyten und T-Zellen
3.1.7 Nachweis der TRAP-mRNA in Megakaryozytenlinien
3.1.8 Induktion der sTRAP-Freisetzung
3.1.9 Induktion von Adhäsionsmolekülen auf Endothelzellen über CD40
3.1.10 Induktion der Chemokinsekretion durch Endothelzellen über CD40
3.1.11 in vivo Nachweis der TRAP-Expression auf Thrombozyten
3.1.12 Funktion von sTRAP auf Endothel
3.1.13 sTRAP als Marker für die Thrombozytenaktivierung in vivo 3.2 CD40 auf Thrombozyten
3.2.1 Oberflächenexpression von CD40
3.2.2 Western Blot zur Detektion von CD40
3.2.3 Stimulation der Thrombozytenaggregation über CD40
3.2.4 Einfluß der Interaktion von TRAP und CD40 auf die sTRAP-Freisetzung
4 Diskussion
4.1 Expression und Induktion von TRAP auf Thrombozyten
4.2 Lokalisation und Struktur von TRAP auf Thrombozyten
4.3 Funktion von TRAP auf Thrombozyten
4.4 Funktion von CD40
5 Zusammenfassung
Summary
6 Literaturverzeichnis
Danksagung
Publikationen
Lebenslauf

More Information:

Online available: http://www.diss.fu-berlin.de/1999/60/indexe.html
Language of PhDThesis: german
Keywords: inflammation, CD40, platelets, endothelium, TRAP
DNB-Sachgruppe: 30 Chemie
Date of disputation: 06-Sep-1999
PhDThesis from: Fachbereich Biologie, Chemie, Pharmazie, Freie Universität Berlin
First Referee: Prof. Dr. Richard A. Kroczek
Second Referee: Prof. Dr. Ferdinand Hucho
Contact (Author): hennv@rki.de
Contact (Advisor): kroczek@rki.de
Date created:02-Nov-1999
Date available:24-Aug-2000

 

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