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FU Berlin
Digitale Dissertation

Christian Gerhard Ulrich Meltendorf :
Vitrifikation von Hornhautlamellen
Vitrification of corneal lamellae

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|Zusammenfassung| |Inhaltsverzeichnis| |Ergänzende Angaben|

Zusammenfassung

In der hier vorgestellten Arbeit ist es erstmals gelungen, Hornhautlamellen zu vitrifizieren, ohne daß es dabei zu einer Eis- oder Rißbildung im Gefriergut gekommen ist. Grundlage für diesen Erfolg waren drei Modifikationen des Vitrifikationsverfahrens. (1) Statt der bislang für Gefrierversuche verwendeten Korneoskleralscheiben wurden in dieser Untersuchung hintere Hornhautlamellen verwendet. Die damit einhergehende Volumenreduktion bedingte einen schnelleren und besser zu kontrollierenden Wärmeaustausch zwischen Hornhautgewebe und Kühlmedium. (2) Durch Verwendung eines sehr dünnwandigen, transparenten und teflonbeschichteten Gefriergutträgers (Kapton/Teflon Peel Pouch) konnte ein direkter Kontakt von Hornhaut und Gefriergutträger ohne Endothelzellschädigung erreicht werden, wodurch ebenfalls der Wärmeaustausch optimiert wurde. (3) Die für die Vitrifikation förderliche schockartige Abkühlung bis -140° C wurde mit einer neu entwickelten Einfriervorrichtung unter Verwendung von Methylcyclopentan und Propan als Kühlmittel erreicht. Da trotz erfolgreicher Vitrifikation nur maximal 10% der Endothelzellen nach dem Erwärmen vital waren, sollte die dafür als ursächlich ermittelte Toxizität der Kryoprotektoren und die während des Aufwärmvorganges auftretende Devitrifikation weiter untersucht werden.

Inhaltsverzeichnis

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0.. Titelblatt. .
1.. Grundlagen und Problemstellung. 7.
1.1. Anatomie und Physiologie der Hornhaut. 7.
1.2. Hornhauttransplantation. 12.
1.3. Hornhautbanken. 15.
1.4. Routineververfahren der Hornhautkonservierung. 16.
1.5. Die Gefrierkonservierung der Hornhaut. 19.
1.6. Ziele dieser Arbeit. 35.
2.. Material und Methoden. 38.
2.1. Das Hornhautgewebe. 38.
2.2. Präparation der Hornhautlamellen. 38.
2.3. Das Berlin-Mikrokeratom. 40.
2.4. Vitrifikationsmedium. 42.
2.5. Einschleusung des Vitrifikationsmediums. 43.
2.6. Der Gefriergutbehälter. 45.
2.7. Das Vitrifikationsverfahren. 47.
2.8. Das Auftauverfahren. 49.
2.9. Ausschleusung des Vitrifikationsmediums. 49.
2.10. Die Organkultur. 50.
2.11. Die Vitalfärbung. 51.
2.12. Fotodokumentation und Endothelzellanalyse. 53.
2.13. Übersicht über den gesamten Verfahrensablauf. 54.
3.. Ergebnisse. 56.
3.1. Endothelzellanalyse unbehandelter Hornhautlamellen. 56.
3.2. Verträglichkeit der Oberfläche des Gefriergutbehälters mit dem Hornhautendothel. 58.
3.3. Vitrifikation von Hornhautlamellen bei -140°C. 59.
3.4. Fotografische Dokumentation der Devitrifikation bei Raumtemperatur. 66.
3.5. Endothelzellanalyse nach erfolgter Vitrifikation bei -196°C und Erwärmung im Wasserbad. 67.
3.6. Toleranz des Hornhautendothels gegenüber dem verwendeten Organkulturmedium. 69.
3.7. Toleranz des Hornhautendothels gegenüber der verwendeten Vitrifikationslösung. 71.
4.. Diskussion. 76.
4.1. Erzielte Fortschritte. 76.
4.2. Vorteile und Perspektiven der Vitrifikation. 79.
4.3. Toxizität der Kryoprotektoren. 80.
4.4. Devitrifikation. 82.
4.5. Berücksichtigung der post-mortem-Zeit. 84.
4.6. Aussagekraft der Endothelzellanalyse. 84.
4.7. Vorschläge für Untersuchungen zur weiteren Verbesserung des Vitrifikationsverfahrens. 85.
5.. Zusammenfassung. 88.
6.. Literaturverzeichnis. 90.

Ergänzende Angaben:

Online-Adresse: http://www.diss.fu-berlin.de/2001/50/index.html
Sprache: Englisch
Keywords: vitrification, cryopreservation, cornea, Berlin Microkeratome, Kapton-Teflon peel pouch
DNB-Sachgruppe: 33 Medizin
Datum der Disputation: 06-Apr-2001
Entstanden am: Fachbereich Humanmedizin, Freie Universität Berlin
Erster Gutachter: Prof. Dr. Friedrich Hoffmann
Zweiter Gutachter: Prof Dr. Heinrich Bleckmann
Kontakt (Verfasser): Meltendorf@em.uni-frankfurt.de
Kontakt (Betreuer): fhoffman@zedat.fu-berlin.de
Abgabedatum:03-Apr-2001
Freigabedatum:05-Apr-2001

 

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