DARWIN Digitale Dissertationen English Version Strich

FU Berlin
Digitale Dissertation

Annette Hering :
Analysen zur IFN-gamma Induktionskinetik von humanen naiven Th-Zellen
Analyses of IFN-gamma kinetics of induction of human naive Th-cells

 FU Logo

|Zusammenfassung| |Inhaltsverzeichnis| |Ergänzende Angaben|

Zusammenfassung

Die rheumatoide Arthritis (RA) ist eine Autoimmunerkrankung, die durch eine chronische Gelenksentzündung charakterisiert ist. In der Synovia von RA-Patienten lassen sich als dominante Zellpopulation CD4+T-Helferzellen nachweisen. Es wird diskutiert, ob ein Übergewicht an inflammatorrischen Zytokinen (Th1-Zytokine) auf der Ebene der antigenerfahrenen CD4+ Th-Zellen als mögliche Ursache für das Entstehen und die Unterhaltung des Krankheitsbildes verantwortlich ist. Diese Arbeit liefert erstmalig Ergebnisse, die zeigen, daß eine vermehrte Expression von inflammatorischen Zytokinen wie dem IFN-gamma schon auf der Ebene der naiven CD4+ Th-Zellen nachweisbar ist. Es konnte ein Isolierungsprotokoll etabliert werden, in dem naive Zellen auf der Ebene der CD31+ und CD31- CD45RA+ CD45RO-CD4+ Th-Zellen mit hoher Reinheit aus dem peripheren Blut mit Hilfe der magnetischen Zellsortierung angereichert werden. Die beiden Zellpopulationen wurden für 5 Tage in Kultur genommen und mit anti CD3 und anti CD28 stimuliert. Die isolierten Subpopulationen differenzieren sich in Anwesenheit von IL-12 und aIL-4 zu inflammatorischen Effektorzellen aus. In beiden Subpopulationen konnte mit ansteigender IL-12 Konzentration eine zunehmende Induktion von IFN-gamma positiven Effektorzellen nachgewiesen werden. Die getrennte Betrachtung der CD31+ und CD31- Th-Zellen ist notwendig. Während die CD31+ CD45RA+ CD45RO- CD4+ Th-Zellen von gesunden Spendern homogen auf die IL-12 Stimulation reagierten, wiesen die CD31- CD45RA+ CD45RO- CD4+ Th-Zellen eine deutlich größere interindividuelle Varianz in Bezug auf die Zytokin expression auf. Die naiven T-Zellen der Patientengruppe zeichneten sich durch eine verstärkte IL-12 Sensibilität aus und exprimierten auch im unpolarisierten Zustand mehr IFN-gamma als die naiven Zellen der Gesunden. Die Patientendaten sprechen dafür, dass eine Störung des Zytokingleichgewichtes bereits bei den naiven T-Helferzellen vorliegt. Dies deutet auf einen genetischen Hintergrund der RA hin.

Inhaltsverzeichnis

Die gesamte Dissertation können Sie als gezippten tar-File oder als zip-File laden.

Durch Anklicken der Kapitelüberschriften können Sie das Kapitel in PDF-Format laden:

0. Titelblatt und Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
2. Immunologische Grundlagen 3
2.1 Rheumatoide Arthritis 3
2.2 Funktion des Immunsystems 4
2.3 T-Helferzellen 5
2.4 Naive und antigenerfahrene Zellen 7
2.5 Die zentrale Rolle der CD4+Th-Zellen in der Pathogenese der RA 9
3. Material und Methoden 13
3.1 Zellkulturmedien und -bedingungen 13
3.2 Methoden der Zelltrennung 13
3.3 Antikörper 19
3.4 Kopplung von Haptenen und Flurochromen an Antikörper 21
3.5 Polyklonale in vitro Th-Zell-Stimulation 23
3.6 Coaten von Zellkulturplatten mit immobilisierten Antikörpern 24
3.7 Immunfluoreszenzfärbungen 24
3.8 Durchflußzytometrie 25
3.9 Quantifizierung der IFN-gamma Konzentration in Zellkulturüberständen durch fluoreszente Beads 26
4. Ergebnisse 27
4.1 Isolierung humaner naiver Th-Zellen 27
4.2 Analyse der Effektor-Zytokinproduktion der CD45RA+CD4+Th-Zellen 33
4.3 CD31+ und CD31- CD45RA+CD45RO-CD4+Th-Zellsubpopulationen 42
4.4 CD31+ und CD31-Th-Zellisolierung mittels FACS-Sorter 51
4.5 IFN-gamma Induktionskinetik von gesunden Spendern und Patienten 60
5. Diskussion 75
5.1 Die magnetische Mehrparameter Zellsortierung 75
5.2 CD45RA+CD45RO-CD4+Th-Zellkulturen 76
5.3 CD45RA+CD45RO-CD4+Th-Zellen: eine homogene Population? 78
5.4 CD31+und CD31-Th-Zellen 80
5.5 Analyse des Zytokinmusters von Th1 polarisierten CD31+ und CD31- Th-Zellen gesunder Spender 82
5.6 Analyse der Patienten 84
5.7 MACS und FACS-Sortierung im Vergleich 85
5.8 Weiterführende Experimente 87
6. Zusammenfassung 89
Anhang 91
Literaturverzeichnis 91
Abkürzungsverzeichnis 101
Danksagung 103

Ergänzende Angaben:

Online-Adresse: http://www.diss.fu-berlin.de/2002/170/index.html
Sprache: Deutsch
Keywords: Rheumatoid artrithis, naive T-cells, CD31-cells
DNB-Sachgruppe: 33 Medizin
Datum der Disputation: 23-Jul-2002
Entstanden am: Fachbereich Humanmedizin, Freie Universität Berlin
Erster Gutachter: Prof. Dr. med. Jürgen Braun
Zweiter Gutachter: Prof. Dr. med. Jochen Sieper
Kontakt (Verfasser): kollonitsch@hmi.de
Kontakt (Betreuer): thiel@drfz.de
Abgabedatum:29-Aug-2002
Freigabedatum:30-Aug-2002

 

|| DARWIN|| Digitale Dissertationen || Dissertation|| English Version|| FU Berlin|| Seitenanfang ||

Mail-Icon Fragen und Kommentare an:
darwin@inf.fu-berlin.de

© Freie Universität Berlin 1999